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¿Qué es HPLC y Cómo Verifica la Pureza de Péptidos?

Categoría: Preguntas Generales

HPLC (Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento) es el método estándar para analizar péptidos. Separa componentes y mide qué porcentaje es el péptido puro vs impurezas.

Respuesta

HPLC explicado: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO: Técnica química que separa componentes en una mezcla. PROCESO: Muestra líquida inyectada en columna. Solventes bajo presión ('móvil') arrastran componentes a través de material sólido ('estacionario'). Componentes se separan por tiempo de retención (tardanza en salir). DETECTOR (luz UV): Mide absorbancia de cada componente. RESULTADOS: Gráfico (cromatograma): eje X = tiempo, eje Y = intensidad. PICOS = componentes diferentes. ÁREA DE PICO = cantidad relativa. PUREZA = área de pico principal / área total. Ej. pico principal 98.5% → pureza 98.5%. VENTAJAS DE HPLC: Detecta incluso pequeñas impurezas (<1%). Mide pesos moleculares relativos. Identifica dímeros, oligómeros, productos de degradación. LIMITACIONES: No identifica qué ES la impureza (necesita MS para eso). Requiere estándares de comparación. Caro (~$300-800 por análisis).

Pasos

  1. Inyección: Péptido disuelto se inyecta en la columna HPLC.
  2. Separación: Solventes arrastran componentes a diferentes velocidades.
  3. Detección: Detector UV mide absorbancia de cada pico.
  4. Gráfico: Cromatograma muestra picos: pico grande = sustancia principal, picos pequeños = impurezas.
  5. Interpretación: % Pureza = área del pico principal / área total de todos los picos.

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